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    熒光定量PCR實驗時的好方法

    更新時間:2020-07-18      點擊次數:2015

    實時熒光定量PCR技術實現了PCR從定性到定量的飛躍,具有特異性更強、有效解決PCR污染問題、自動化程度高等特點,成為核酸分子定量的標準方法。在做熒光定量PCR實驗時建議使用這些耗材:96孔光學反應板配合光學膜,0.2ml光學八聯反應管配合光學膜,0.2ml光學八聯反應管配合平蓋的光學八聯管蓋等。在做熒光定量PCR實驗時有一些好的方法分享給大家,例如在使用單管或者8連管做實驗時,如果在樣本數量不多的時候,建議在樣品加熱塊(TRAY)上對稱的安放樣品,并且先放在第6列或者第7列,然后逐漸向兩邊放置。這樣熱蓋壓下來的時候不至于發生傾斜,每個反應管的受力和受熱都比較均勻,提高了孔與孔之間的數據精密性。又例如使用96孔板做實驗的時候,建議使用光學膜代替蓋子來密封反應孔。封膜的方法要先沿著96孔板的縱向壓膜,然后在橫向,后在沿著板的邊緣按壓密封。Pilot5-8T凍干機應用示例(熒光PCR凍干):

    1. 探針、底物、引物原料要求確定。
    2. 凍干溶液配方開發,采用正交法或響應曲面法進行輔料篩選。
    3. 選擇適合的包材和模具。
    4. 設計凍干曲線配合輔料篩選。
    5. 確定配方及工藝。
    6. 穩定性測試。
    7. 根據穩定性測試結果修正工藝或配方。
    8. 整個環節注意環境、設備、人員的結合。

     

    型號

    Pilot3-6T

    Pilot5-8T

    Pilot7-12T

    Pilot10-15T

    凍干面積

    0.42

    0.56

    0.84

    1.05

    22西林瓶裝量(20ML

    ≥900

    ≥1170

    ≥1500

    ≥2100

    16西林瓶裝量(5ML

    ≥1700

    ≥2210

    ≥3100

    ≥4100

    冷阱溫度(空載)

    -85

    真空度(空載)

    ≤1Pa

    板層溫度(空載)

    -55

    板層制冷方式

    硅油循環

    板層數量

    3+1

    4+1

    4+1

    5+1

    板層尺寸(mm

    350*400

    350*400

    350*600

    350*600

    捕水能力

    6L

    8L

    12L

    10L

    凍干效率

    3L/24H

    5L/24H

    7L/24H

    10L/24H

    板層間距

    100mm

    80mm

    90mm

    100mm

    穿墻隔離

    凍干曲線擬合度

    100%

    100%

    100%

    100%

    晶型控制

    蒸汽分壓控制

    升華結束判定

    凍干終點測試

    壓塞

    液壓

    整機尺寸 (約)

    W860*D1400*H1800

    W860*D1400*H1800

    W860*D1700*H1900

    W860*D1700*H1900

     

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