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多元醇類凍干保護劑包括甘油、甘露醇、山梨糖醇、肌醇、木糖醇、叔丁醇、側金盞花醇等,這一類凍干保護劑是比較常用較為普遍的凍干保護劑。以甘油作為凍干保護劑來介紹一下在蛋白質凍干中的作用。甘油具有良好的滲透能力,可以進入細胞內部和胞內大分子形成氫鍵以取代干燥脫除的水分,從而維持蛋白質、碳水化合物及脂肪等大分子活性物質的原有結構。此外,甘油還可以起到降低細胞脫水皺縮和緩解復水腫脹的效果。另外醇和糖類相似均具有醇和糖類羥基官能團,均能產生“優先水化作用”以及改變體系的玻璃態轉變溫度等,...
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二糖又名雙糖,雙糖是碳水化合物的一種。它是由兩個單糖分子經縮合反應除去一個水分子而成的糖。例如乳糖由葡萄糖和半乳糖組成,蔗糖由葡萄糖和果糖組成,麥芽糖由兩個葡萄糖組成等。二糖作為常用的凍干保護劑,能夠有效增加蛋白凍干穩定性,但是用它們作保護劑得到的無定形蛋白凍干固體具有較低的Tg,對儲存過程中的高溫和高濕條件耐受較差。大分子量糖能夠增加凍干后固體的Tg,增加凍干后穩定性,但是對于低濃度蛋白活性保護作用不理想。例如蔗糖對蛋白質具有保護作用,葡聚糖在冷凍和干燥過程中不能防止蛋白質...
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聚合物又稱加聚物。由一種單體經聚合(加聚)反應而成的產物。分子具有重復的結構單位。包括晶態結構、非晶態結構、取向態結構以及織態結構。聚合物包括聚乙二醇、PVP、明膠、聚乙烯亞胺等。聚合物常用作為蛋白質的冷凍保護劑,通常聚合物的穩定作用取決于聚合物的多重性質,如優先從蛋白質表面析出、表面活性、使蛋白質溶液私度升高從而阻止其他小分子(如糖及多輕基化合物)的結晶、抑制冷凍過程中pH值的劇烈變化等。不同聚合度及濃度的聚合物所提供的保護作用不同,如聚合度大的PvP有著較高的玻璃化溫度,...
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氨基酸是含有氨基和羧基的一類有機化合物的通稱。目前發現的天然氨基酸就有300多種,基本氨基酸也有二十個品鐘。氨基酸應用于食品行業、醫藥行業、化妝品行業等。氨基酸是常見的蛋白質保護劑之一。在冷凍過程中,低濃度的甘氨酸可通過抑制10或100mmol/L磷酸緩沖鹽結晶所致pH值的改變而阻止蛋白質藥物變性。無定型甘氨酸可阻止凍干過程中重組人生長激素的聚集;結晶型甘氨酸能升高成品的塌陷溫度,阻止因塌陷而引起的蛋白質藥物的破壞。常用的氨基酸類蛋白質保護劑有脯氨酸、谷氨酸鈉、丙氨酸、甘氨酸...
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熒光PCR的探針法分為全基因組核酸探針、克隆探針、寡核苷酸探針、單鏈RNA探針、cDNA探針、蛋白質探針以及酶探針。帶大家一起了解下寡核苷酸探針、cDNA探針、RNA探針的特點。寡核苷酸探針特異性較高,區別染色體上一個堿基的突變;由于其鏈短,分子量小,雜交時間較短(僅需1-2小時),可預測雜交條件,可直接利用DNA序列人工合成獲得特異片段而無需分子克隆,獲得探針相對容易。但是由于其鏈短致使標記率較低,也影響了檢測的敏感性,僅能檢出含很少的標本。cDNA探針以RNA為模板,用反...
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二甲基亞砜(DMSO)是一種有機化合物,常溫下為無色無臭的透明液體,是一種吸濕性的可燃液體。具有高沸點、熱穩定性好、與水混溶的特性??勺饔袡C溶劑、反應介質和有機合成中間體。也可用作合成纖維的染色溶劑、去染劑、染色載體,以及回收乙炔、二氧化硫的吸收劑。二甲基亞砜是一種既溶于水又溶于有機溶劑。廣泛用作溶劑和反應試劑,具有很高的選擇抽提能力。二甲基亞砜是如何應用的呢?下面簡單介紹下,DMSO是一種重要的滲透型細胞保護劑。培養液中DMSO濃度為10%時,細胞生長抑制率近100%;1‰...
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甲酰胺是一種化合物,無色透明液體,略有氨味,是合成醫藥、香料、染料等的原料,也可作為溶劑用于合成纖維的抽絲、塑料加工、木質酪素墨水的生產等。通過甲酸甲酯和氨的反應制備甲酰胺的方法。甲酰胺是可作為溶劑、有機合成原料、醫藥原料等的在工業上有用的物質。甲酰胺是被較早發現并應用的PCR凍干保護劑之一,能促進引物模板退火,能提高PCR反應的特異性。分享下熒光PCR試劑凍干的示例:(1)將熒光PCR擴增緩沖液、引物、探針、熱啟動Taq酶、UNG酶、dATP、dGTP、dCTP、dTTP、...
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聚乙烯吡咯烷酮簡稱PVP,是一種非離子型高分子化合物,是N-乙烯基酰胺類聚合物中被研究得深、廣泛的精細化學品品種。應用于醫藥、化妝品、食品等行業??勺稣澈蟿?、增溶劑、分散或共研磨劑、活性成分穩定劑等。PVP按其平均分子量大小分為四級,用K值表示,K值實際上是與PVP水溶液的相對粘度有關的特征值,而粘度又是與高聚物分子量有關的物理量,一般K值越大,其粘度越大,粘接性越強。熒光PCR凍干時,PVP能夠增強PCR產物生成量,其中PVP也能有效提高PCR效率和特異性。PVP作為PCR...
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